Гост 51446 99 вода дистиллированная

Содержание

Государственный стандарт РФ ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) «Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований» (введен в действие постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 601-ст) (отменен)
ГАРАНТ:
ГОСТ Р 51446-99 Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований
Способы доставки
Оглавление
Этот ГОСТ находится в:
Организации:
Microbiology. Food stuffs. General rules for microbiolocal examinations
5 Требования к персоналу
6 Подготовка оборудования
7 Приготовление и стерилизация питательных сред и реактивов
8 Лабораторные пробы
9 Методы исследований и обработка результатов
+ 0,ln2)d ’
2,2 ■ 10 _3

Государственный стандарт РФ ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) «Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований» (введен в действие постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 601-ст) (отменен)

Государственный стандарт РФ ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96)
«Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований»
(введен в действие постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 601-ст)

Дата введения 2001-01-01

ГАРАНТ:

Приказом Ростехрегулирования от 18 декабря 2008 г. N 480-ст настоящий ГОСТ отменен с 1 января 2010 г. в связи с принятием и введением в действие ГОСТ Р ИСО 7218-2008

1 РАЗРАБОТАН Временным творческим коллективом с участием членов Технического комитета по стандартизации ТК 116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

ВНЕСЕН ТК 116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 601ст

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 7218-96 «Микробиология продуктов питания и кормовых продуктов. Общие правила микробиологических исследований», содержит дополнительные требования, отражающие потребности экономики страны (наименование, разделы 1, 2, 3, 4, 5, пункты 6.2.3, 6.6, 8.1, 9.1, 9.2, 9.3.1), за исключением кормов

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Источник

ГОСТ Р 51446-99
Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований

Купить ГОСТ Р 51446-99 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль»

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
Курьерская доставка (7 дней)
Самовывоз из московского офиса
Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устанавливает общие правила проведения микробиологических исследований.

Стандарт способствует ооснованности исследований, обеспечению идентичности общих технических условий приемов исследований, применяемых в различных лабораториях, достижению сопоставимости результатов, полученных в разных лаюораториях, и содействию по защите здоровья персонала лаборатории путем устранения опасности заражения.

Рекомендуется использовать ГОСТ Р ИСО 7218-2008 (ИУС 12-2009)

Дата введения	01.01.2001
Добавлен в базу	01.09.2013
Завершение срока действия	01.01.2010
Актуализация	01.02.2020

22.12.1999	Утвержден	Госстандарт России	601-ст
Разработан	ТК 116 Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки
Издан	ИПК Издательство стандартов	2000 г.
Издан	Стандартинформ	2005 г.

Microbiology. Food stuffs. General rules for microbiolocal examinations

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Общие правила микробиологических исследований

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

ВНЕСЕН ТК 116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 601ст

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 7218—96 «Микробиология продуктов питания и кормовых продуктов. Общие правила микробиологических исследований», содержит дополнительные требования, отражающие потребности экономики страны (наименование, разделы 1, 2, 3, 4, 5, пункты 6.2.3, 6.6, 8.1, 9.1, 9.2, 9.3.1), за исключением кормов

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2005 г.

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

4.12.2 Обслуживание и контроль

После работы с применением иммерсии линзы очищают от использованных иммерсионных веществ, не допуская ухудшения их оптических свойств.

Не реже одного раза в год уполномоченный сотрудник лаборатории должен проводить генеральную чистку микроскопа, а также проверку его механической и оптической частей.

4.13 Газовая, спиртовая горелки или прокаливатель проволоки

Газовую и спиртовую горелки используют для создания и поддержания защитной зоны вокруг пламени. Они применяются для стерилизации металлических игл и петель путем доведения их до красного каления.

При работе с патогенными бактериями для стерилизации металлических игл и петель предпочтительнее использовать прокаливатель проволоки.

4.14 Дозатор питательных сред и реактивов

Дозатор — инструмент или аппарат, применяемый для дозирования питательных сред и реактивов в пробирки, флаконы или чашки Петри (например мерный цилиндр, обычная пипетка, автоматическая пипетка, перистальтический насос или аппарат для автоматической подачи).

Если требуется асептическое дозирование питательных сред или реактивов, все части инструмента или аппарата, контактирующие с разливаемым продуктом, должны быть стерильными по 6.2. Точность инструментов или аппаратов должна соответствовать точности измерения разливаемых объемов. При приготовлении десятикратных разведений относительная погрешность измерения объемов жидкости, используемой для разбавлений, не должна превышать ±2%.

4.14.3 Обслуживание и контроль

Дозаторы содержат в безукоризненном состоянии в соответствии с инструкциями изготовителя.

Дозируемые объемы регулярно контролируют.

4.15 Механический смеситель

Аппарат используется для равномерного перемешивания различных жидкостей (например десятикратных разведений и жидких проб) или для получения жидкой суспензии бактериальных клеток. Принцип действия основан на приведении содержимого пробирок в некруговое (вихревое) вращение (приборы типа Vortex).

4.16 Прибор для подсчета колоний

Прибор должен быть оборудован осветительной системой с темной подложкой, увеличительным стеклом с увеличением на менее 1,5 х и механическим или электронным счетчиком. Для подсчета могут быть использованы любые другие равноценные автоматические устройства для подсчета и равноценные по производительности (например лазерный счетчик).

4.17 Оборудование для культивирования в модифицированной атмосфере

4.17.1 Описание оборудования

Герметически закрываемый сосуд или любые другие соответствующие аппараты, способные поддерживать искусственную атмосферу, в которой находится питательная среда, на все время ее инкубирования (например анаэробное термостатирование). Могут быть использованы другие устройства аналогичного действия, например, анаэробные камеры. Установку и эксплуатацию проводят по инструкциям изготовителя.

4.17.2 Использование оборудования

Состав модифицированной атмосферы, получаемой путем смешивания газов (например из газовых баллонов) или с помощью других подходящих средств (готовые покупные упаковки с газом), должен быть оговорен в нормативном документе.

4.17.3 Обслуживание и контроль

В каждой камере во время ее использования должен находиться индикатор состава атмосферы. Если используют катализатор, его регулярно регенерируют в соответствии с инструкциями изготовителя. Оборудование для инкубирования в модифицированной атмосфере регулярно очищают и обеззараживают.

4.18 Прочее оборудование

Для проведения исследований используют и другое оборудование и приспособления: устройства для фильтрования, стеклянные или пластиковые емкости (пробирки, флаконы, бутыли), стеклянные или пластиковые чашки Петри (как правило диаметром от 90 до 100 мм), стеклянные или пластиковые пипетки вместимостью 10, 2, 1 см 3 , инструменты для отбора проб, иглы и петли хромовоникелевые, платиноиридиевые, одноразовые пластиковые и из других материалов.

5 Требования к персоналу

Весь персонал, работающий в микробиологической лаборатории, должен быть соответствующим образом подготовлен для правильного выполнения операций, возложенных на него. Персонал, выполняющий работу с микроорганизмами III—IV групп патогенности, должен отвечать требованиям [1].

Сотрудники, отвечающие за проведение испытаний, должны иметь хорошее знание и практический опыт работы с изучаемыми микроорганизмами и микробиологическими методами. Они должны уметь оценивать точность и воспроизводимость, требуемые для получения достоверных результатов. Для этого они могут, например, принимать участие в круговых сличительных испытаниях, использовать стандартные образцы или проводить самооценочные тесты на определение количества микроорганизмов.

Весь персонал должен получать по мере необходимости актуализированную информацию по вопросам гигиены и безопасности работ в лаборатории.

5.2 Личная гигиена

Во избежание заражения проб и питательных сред, а также для предупреждения инфицирования персонала предпринимают следующие меры предосторожности:

— лабораторная одежда должна быть светлой, чистой и хорошего качества, фабричного изготовления из малогорючего материала. В этой одежде нельзя выходить из рабочей зоны, в частности, в туалет;

— надевают, если это необходимо, защитные повязки на голову и бороду;

— при работе с микроорганизмами III—IV групп патогенности применяют средства индивидуальной защиты согласно [1].

— ногти содержат в исключительной чистоте, хорошо ухоженными, желательно короткими;

— до и после микробиологических исследований и непосредственно после посещения туалета необходимо мыть руки теплой водой, желательно из нерегулируемого вручную крана, используя жидкое или порошковое мыло или дезинфицирующее средство, поступающее из дозирующего устройства, содержащегося на должном уровне чистоты. Для сушки рук используют одноразовые бумажные или матерчатые полотенца;

— при посеве необходимо избегать разговоров, кашля и т. д.;

— не курить, не пить и не принимать пищу в рабочей зоне;

— особые предосторожности должны предприниматься лицами, имеющими инфекцию (панариций) или заболевание, возбудители которого способны заражать пробу, что отразится на результатах;

— не хранить пищевые продукты для личного потребления в лабораторных холодильниках.

6 Подготовка оборудования

6.1 Предварительная подготовка

Подготовка оборудования, используемого в микробиологии, должна гарантировать его чистоту и стерильность вплоть до момента использования.

Оборудование, включая новое, должно быть вымыто перед применением.

Пробирки и флаконы закрывают перед стерилизацией подходящим образом (ватными, металлическими пробками и т. д.). В концы пипеток вкладывают по кусочку ваты или других подходящих материалов.

При необходимости стерилизуемое оборудование помещают в специальные контейнеры или заворачивают в подходящий материал (специальная бумага, алюминиевая фольга и другие). Оборудование стерилизуют в автоклаве отдельно от сред и других водных растворов, доступ пара к нему должен быть свободным, иначе стерилизация будет неэффективной.

6.2 Стерилизация оборудования

6.2.1 Стерилизация сухим горячим воздухом

Оборудование нагревают в стерилизационном шкафу по 4.10 не менее 1 ч при температуре от 170 до 180 °С.

6.2.2 Стерилизация влажным паром

Оборудование нагревают не менее 15 мин при температуре 121 °С и выше в автоклаве (по 4.5),

желательно снабженном вакуумной сушилкой. Используют термоиндикаторы для контроля достижения требуемой температуры (например специальную бумагу).

6.2.3 Стерилизация оборудования, используемого для отбора проб

Допускается стерилизация оборудования, применяемого для отбора проб (посуды, инструмента и материалов), в соответствии с ГОСТ 26668.

6.3 Оборудование одноразового использования

Одноразовое оборудование используют таким же образом, как и стеклянную посуду многоразового использования (чашки Петри, пипетки, флаконы, пробирки и другое), если они имеют сходные технические характеристики.

Поэтому желательно получить у изготовителя подтверждение, что предлагаемое оборудование пригодно для микробиологического использования (особенно по стерилизуемости) и что материал не содержит веществ, ингибирующих рост микроорганизмов.

Одноразовое оборудование перед уничтожением обеззараживают. Помимо методов, приведенных в 6.6, может применяться сжигание. Если имеется в распоряжении прокаливатель, обеззараживание и уничтожение могут быть совмещены в одной операции.

6.4 Содержание чистого оборудования

Чистое оборудование хранят в условиях, обеспечивающих сохранность его чистоты и защиту от пыли.

6.5 Содержание стерильного оборудования

Перед использованием оборудование хранят в условиях, обеспечивающих сохранность его стерильности. Одноразовое оборудование хранят в соответствии с рекомендациями изготовителя, без повреждения упаковки. Оборудование, подготовленное в лаборатории, хранят в чистых контейнерах.

При приобретении готового стерильного оборудования для микробиологических целей, проверяют на каждой упаковке наличие информации о сроке годности (или дате изготовления). Герметически упакованное оборудование хранят не более трех месяцев. Упакованное, но не закрытое герметически оборудование хранят в течение более короткого срока (например 8 дней).

После использования (культивирования микроорганизмов или контакта с ними) оборудование и его содержимое, независимо от вида микроорганизмов, обеззараживают перед очисткой или уничтожением. Например, ватные тампоны удаляют из пипеток только после обеззараживания последних, пробирки с жидкой средой обеззараживают непосредственно перед мойкой. Обеззараживание проводят одним из следующих способов:

— стерилизацией влажным паром в автоклаве (по 4.5) не менее 30 мин при температуре 121 °С и выше всего оборудования и материалов, которые контактировали с культурами микроорганизмов (посевы на твердых или жидких питательных средах, зараженные реактивы, оборудование и другое);

— путем погружения коррозийно-устойчивого оборудования, например пипеток, в дезинфицирующий раствор (пипетки полностью погружают в вертикальном положении в раствор, избегая образования в каналах пузырьков воздуха).

При работе с микроорганизмами III—IV групп патогенности обеззараживание оборудования проводят согласно [1].

Пластиковые пипетки используют только однократно. Оборудование из пластмасс может быть сожжено без обеззараживания, если это допускается законами страны.

Оборудование моют только после его обеззараживания. Емкости освобождают от их содержимого. Перед мойкой удаляют с пробок и колпачков печати, если они имеются.

Тщательно моют пробки, колпачки и стеклянную посуду в горячей воде раствором готового детергента.

При его отсутствии может быть использован раствор карбоната натрия массовой долей 0,125 % с последующим погружением в разбавленную кислоту (например соляную кислоту НС1 концентрации с = 0,1 моль/дм 3 ).

Все оборудование промывают дистиллированной или равноценной по качеству водой.

Для облегчения операций очистки могут быть использованы специальные устройства (например моечные аппараты для пипеток, чашек, ультразвуковые аппараты и другие).

7 Приготовление и стерилизация питательных сред и реактивов

Тщательное приготовление питательных сред — один из основных этапов микробиологического исследования, требующий особого внимания.

7.1 Дистиллированная вода

Используемая вода должна быть дистиллированной или равноценной по качеству, то есть свободной от веществ, способных ингибировать или воздействовать на рост микроорганизмов в период испытания. Если дистиллированную воду получают из хлорированной, перед перегонкой необходимо нейтрализовать хлор.

Дистиллированную воду хранят в емкостях, изготовленных из инертных материалов (например нейтрального стекла, полиэтилена и т. д.), в которых перед использованием установлено отсутствие ингибирующих веществ.

П римечание —В ряде случаев необходимо использовать свежеприготовленную воду, свободную от растворенного диоксида углерода.

Качество воды оценивают по удельному сопротивлению, которое должно быть не менее 300000 Ом/см.

Примечание — Из-за загрязнения при прохождении через ионообменник деминерализованная вода часто имеет повышенное содержание микроорганизмов, поэтому целесообразно проверять такую воду на их содержание. Следует проконсультироваться с изготовителем ионообменника о возможности применения улучшенных методов, уменьшающих микробиологическое заражение воды. После стерилизации путем фильтрования деионизированной воды, сильно контаминированной микроорганизмами, она, однако, еще может содержать вещества, ингибирующие рост некоторых микроорганизмов.

7.2 Приготовление питательных сред

Для приготовления питательных сред используют два способа:

— из отдельных сухих или жидких компонентов;

— из сухой готовой среды.

Емкости, содержащие отдельные сухие компоненты или сухую готовую среду, хранят в темном сухом месте при температуре, установленной изготовителем.

По истечении установленных сроков годности исходные компоненты и готовые среды не используют.

Если сухие компоненты и среды гигроскопичны, необходимо быстро и тщательно закрывать емкости после взятия навесок. Не используют сухие среды, имеющие признаки слеживания или затвердения, свидетельствующие о поглощении влаги.

7.2.1 Обводнение сухих готовых сред

Использование сухих готовых сред проводят в соответствии с требованиями нормативного документа на конкретную готовую среду и/или рекомендациями изготовителя.

7.2.2 Измерение pH

С помощью pH-метра (по 4.4) измеряют и корректируют pH таким образом, чтобы после стерилизации и охлаждения до 25 °С значение pH среды отличалось от требуемого не более чем на ±0,2 pH (если не оговорены другие условия).

Корректировку обычно проводят с помощью раствора гидроокиси натрия (NaOH) концентрации 40 г/дм 3 (примерно 1 моль/дм 3 ) или соляной кислоты (НС1) концентрации 36,5 г/дм 3 (примерно 1 моль/дм 3 ).

7.2.3 Разливка сред

Среды разливают в соответствующие емкости вручную или с помощью автоматических аппаратов (по 4.14).

Для предупреждения выбрасывания среды при стерилизации в автоклаве используют емкость, имеющую объем в 2—Зраза больший объема разливаемой среды.

Стерилизацию питательных сред и реактивов проводят различными способами, в том числе:

В соответствии с требованиями нормативного документа на конкретный метод испытаний и/или рекомендаций изготовителя некоторые среды и реактивы используют без специальной стерилизации.

После стерилизации среды проверяют ее pH, цвет, стерильность и бактериологическую пригодность.

7.3.1 Влажная стерилизация

Влажная стерилизация проводится в отдельном автоклаве (4.5) или в аппарате для приготовления и разливки сред. Обычно эту операцию проводят при температуре 121 °С (245 кПа) в течение 15 мин. Для объемов сред, превышающих 1 дм 3 , продолжительность стерилизации может быть изменена. Во всех случаях следуют указаниям нормативного документа на конкретный метод испытания или инструкциям изготовителя.

Перед стерилизацией емкости со средами должны быть снабжены полосками термочувствительной бумаги (имеющейся в продаже) в количестве, достаточном для фиксирования достижения желаемой температуры во всех частях автоклава.

7.3.2 Стерилизация фильтрованием

Стерилизацию фильтрованием проводят с использованием вакуума или избыточного давления.

При этом используют мембраны и фильтры диаметром пор 0,22 мкм. Перед применением они должны быть простерилизованы в автоклаве (4.5). Закупленные в готовом стерильном состоянии фильтрующие элементы или мембраны используют в соответствии с инструкциями изготовителя.

Различные детали фильтрующих устройств, в собранном или разобранном виде, стерилизуют в автоклаве (4.5) в течение 15 мин при температуре 121 °С. В случае необходимости после автоклавирования проводят сборку этих устройств в асептических условиях в стерильном боксе. Некоторые устройства в собранном виде могут быть закуплены в стерильном состоянии.

Каждая упаковка бутылей, пробирок или чашек Петри должна быть этикетирована и содержать следующую информацию:

— дату приготовления и/или дату истечения срока годности.

7.4.1 Питательные среды и реактивы лабораторного изготовления

Питательные среды, разлитые в бутыли и пробирки, а также реактивы, не использованные немедленно, предохраняют от света и высыхания (например используют при хранении резиновые пробки или завинчивающиеся крышки).

Если не оговорено в нормативном документе на конкретный метод испытания, среды хранят в холодильнике (4.7) не более трех месяцев или при температуре 18—23 °С не более одного месяца в условиях, не допускающих изменения их состава.

Подсохшие среды не используют.

Перед использованием желательно температуру питательной среды довести до температуры в помещении лаборатории.

7.4.2 Готовые питательные среды и реактивы

Готовые питательные среды и реактивы используют в соответствии с инструкциями изготовителя, в которых должны быть указаны сроки годности, температура и условия хранения, условия применения (pH и прочее), контроль качества.

7.5 Расплавление агаровых питательных сред

Питательные среды расплавляют на кипящей водяной бане или другим способом, который дает аналогичный результат (например текучим паром в автоклаве или с помощью микроволновой печи). Избегают перегрева среды и удаляют ее сразу же после расплавления. Перед использованием питательную среду содержат в расплавленном состоянии на бане с терморегулятором (4.9) при температуре (47 ± 2) °С. Питательную среду температурой выше 50 °С не используют. Сохраняют расплавленную питательную среду не более 8 ч. Не использованную до конца среду после ее затвердения не применяют.

В случае особо чувствительных питательных сред длительность нахождения в расплавленном состоянии следует сократить в соответствии с требованиями стандарта на конкретный метод испытания.

7.6 Деаэрирование питательных сред

При необходимости деаэрирования питательную среду нагревают непосредственно перед использованием на кипящей водяной бане или текучим паром в течение 15 мин, пробки или крышки приоткрывают. После прогревания их плотно закрывают и быстро охлаждают среду до рабочей температуры.

7.7 Подготовка чашек Петри

Расплавленную агаровую питательную среду наливают в чашки Петри таким образом, чтобы толщина ее слоя была не менее 2 мм (например для чашек диаметром 90 мм обычно требуется 12 см 3 агаровой среды). Затем для охлаждения и затвердевания среды чашки Петри помещают на холодную горизонтальную поверхность.

Приготовленные таким образом чашки Петри используют немедленно или хранят при условиях, предупреждающих изменение их состава, т. е. в темноте и в холодильнике (по 4.7), не более одной недели. Этот срок может быть удлинен или сокращен согласно требованиям, установленным стандартом на конкретный метод испытания. Маркировку чашек выполняют по 7.4.

Чашки используют после подсушивания. При поверхностном посеве чашки обычно подсушивают с открытыми крышками и перевернутой вниз поверхностью агара в сушильном шкафу при температуре от 25 до 50 °С до тех пор, пока с поверхности среды не исчезнут капли влаги, при этом стараясь не пересушить их дольше. Агар в чашках может быть также подсушен в ламинарном шкафу биологической безопасности выдерживанием в течение 30 мин с полуоткрытыми крышками или в течение ночи — в закрытом состоянии.

Готовые к использованию покупные чашки с агаром хранят и используют в соответствии с инструкциями изготовителя.

8 Лабораторные пробы

Очень важно, чтобы лаборатория получала пробы, которые были бы действительно представительными для продукта и не были повреждены и изменены во время транспортирования или хранения.

Отбор проб проводится в соответствии с требованиями специализированных стандартов, разработанных для рассматриваемых групп продукции.

При отсутствии специализированных стандартов отбор проб проводится по ГОСТ 26668 или по специальному соглашению между заинтересованными сторонами.

8.2 Транспортирование проб

При транспортировании проб в лабораторию обеспечивают их содержание в условиях, предупреждающих любые изменения количества микроорганизмов, присутствующих в них. Предпочтение отдают наиболее быстрым способам транспортирования.

Особое внимание обращают на соблюдение следующих температур при хранении нижеперечисленных продуктов:

— устойчивые продукты — температура окружающей среды;

— свежие и охлажденные продукты — от 0 до 4 °С;

— продукты замороженные и глубокой заморозки — ниже минус 18 °С;

— пастеризованные и аналогичные продукты — от 0 до 4 °С;

— образцы испорченных устойчивых продуктов — от 0 до 4 °С.

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Нестойкие пищевые продукты (например субпродукты, свежая рыба) следует хранить при температуре от 0 до 2 °С.

Образцы испорченных устойчивых продуктов должны транспортироваться в закрытых упаковках для защиты от возможного протекания.

8.3 Приемка и хранение проб

При поступлении проб персонал лаборатории должен проверить их состояние. Если состояние неудовлетворительное или пробы не соответствуют требованиям, лаборатория должна отбраковать их. В особых случаях можно провести испытания таких проб, но в протоколе испытаний должно быть дано обоснование полученных результатов.

Принятые лабораторией пробы документируют таким образом, чтобы их движение вплоть до составления протокола испытаний можно было проконтролировать.

Должна быть зафиксирована следующая информация:

— дата поступления пробы;

— особенности процедуры отбора проб (дата отбора, условия отбора и другие);

— имя и адрес заявителя;

Пробы перед исследованием хранят в условиях, предупреждающих любое изменение в количестве присутствующих микроорганизмов.

Особое внимание должно быть уделено температуре хранения и предельным срокам проведения исследований для следующих продуктов:

— устойчивые продукты — как можно быстрее, до истечения предельных сроков хранения;

— свежие и охлажденные продукты — в течение 24 ч после получения, при необходимости более длительного хранения пробы быстро замораживают при температуре ниже минус 18 °С и отмечают

это в протоколе испытаний, потому что замораживание отдельных продуктов изменяет состав микрофлоры;

— пастеризованные и аналогичные им продукты — как можно быстрее, до истечения предельных сроков хранения;

— образцы испорченных устойчивых продуктов — как можно быстрее, не более 48 ч.

8.4 Отбор навесок пробы

Чтобы избежать заражения окружающей среды и навески, рекомендуется работать в специальном помещении или в боксе. При их отсутствии продукты, для которых заранее известно, что они содержат мало микроорганизмов (например пастеризованные продукты или готовые к употреблению блюда), всегда исследуют в первую очередь, и вслед за ними — более зараженные.

Защита окружающей среды от заражения особенно важна при взвешивании и приготовлении навесок проб интенсивно зараженных порошкообразных продуктов. Эту операцию следует проводить в боксе.

При отборе навесок принимают все меры по исключению любого риска их загрязнения. Для этого предпринимают следующие меры предосторожности:

— если не используют бокс, то работают вблизи открытого пламени;

— в случае упакованных продуктов очищают наружную сторону упаковки в месте ее вскрытия 70 %-ным этанолом; если возможно — фламбируют;

— любой инструмент, который применяют для вскрытия упаковки (консервный нож, ножницы и другой), должен быть стерильным;

— любой инструмент, используемый для отбора навески пробы (ложка, пинцет, пипетка и другой), должен быть стерильным;

— на пластиковый пакет, сосуд и другую емкость (8.3) с навеской осторожно (аккуратно) наносят маркировку, позволяющую идентифицировать исходный образец (пробу).

8.5. Хранение и обеззараживание лабораторных образцов

Кроме особых случаев, лабораторные образцы сохраняют до получения всех результатов анализов, если необходимо, то и более длительное время. Образцы упаковывают в стерильные емкости или пластиковые пакеты и хранят при температуре хранения данного продукта. Охлажденные свежие продукты хранят в замороженном виде.

Испорченные и представляющие опасность лабораторные образцы перед выбрасыванием обеззараживают. Неиспорченные лабораторные образцы выбрасывают без обработки.

9 Методы исследований и обработка результатов

9.1 Гигиенические меры предосторожности при проведении исследований

Для того, чтобы проводить работы в максимально асептических условиях, предпринимают следующие меры предосторожности:

— удостоверяются, что рабочая зона является чистой и отсутствуют сквозняки (двери и окна закрыты);

— обеззараживают рабочую поверхность до и после работы подходящим дезинфицирующим средством;

— перед началом работы удостоверяются в том, что все необходимое для ее проведения, имеется в наличии;

— при проведении работ в стерильном боксе используют стерильные перчатки или перед началом работы обеззараживают руки (например смесью высокомолекулярных спиртов), в процессе работы избегают скрещивания рук;

— при работе вне стерильного бокса открывают пробирки и флаконы в зоне пламени, удерживая их в максимально наклоненном положении;

— работу выполняют как можно быстрее, избегая ненужных движений;

— если в ходе исследований содержимое бокса с пипетками, чашками Петри и т. д. не используют целиком, то после изъятия нужного количества предметов бокс надежно закрывают;

— стерилизуют петли и иглы в пламени до и после употребления; чтобы избежать разбрызгивания веществ и микроорганизмов, используют прокаливатель (по 4.13); при любой возможности применяют одноразовые пипетки и иглы;

— перед обеззараживанием по 6.6 использованные пипетки, шпатели и т. д. помещают в специальные сосуды, содержащие подходящее дезинфицирующее средство (например пипетки помещают в раствор гипохлорита натрия);

— перед обеззараживанием чашки Петри, питательные среды и прочее оборудование, которое может содержать микроорганизмы, помещают в специальные контейнеры, затем подвергают мойке;

— перед обеззараживанием или сжиганием по 6.6 одноразовое оборудование помещают в подходящие контейнеры;

— немедленно удаляют любые брызги зараженных и других продуктов с помощью ватных тампонов или других подходящих материалов, смоченных 70 %-ным этанолом или другим дезинфицирующим средством; перед продолжением работы моют и дезинфицируют рабочую поверхность.

Обращение с продуктами, предположительно зараженными патогенными бактериями (Salmonella, Listeria monocytogenes и т.д.) или токсинами, требует особых мер предосторожности, которые приведены в нормативных документах по безопасности проведения работ в микробиологических лабораториях (например СП 1.2.731). Рекомендуемые меры предосторожности:

— все этапы исследования должны проводиться в стерильном боксе;

— запрещается наполнять пипетки путем засасывания ртом, для этой цели необходимо использовать резиновую грушу или другое механическое устройство.

Аэрозоли являются основной причиной заражения окружающей среды и инфицирования. Аэрозоли образуются при:

— открытии чашек Петри, пробирок и флаконов;

— использовании смесителей, шприцов, центрифуг и т. д.;

— опорожнении пипеток выдуванием;

— стерилизации петель и игл после влажной инокуляции;

— открытии ампул, содержащих лиофилизированные культуры микроорганизмов.

9.2 Приготовление исходной суспензии и разведений

Приготовление исходной суспензии и разведений — по ГОСТ 26669.

Период времени между окончанием приготовления исходной суспензии и посевом на питательную среду не должен превышать 45 мин, если не оговорено иное в соответствующем стандарте на метод испытания конкретного вида продукта.

9.3 Метод подсчета с использованием твердой среды

9.3.1 Посев на агар в чашках Петри

Готовят среды (содержащуюся на водяной бане при 47 °С в расплавленном состоянии), чашки Петри, жидкость для разведений и разведения, подлежащие исследованию в соответствии с 9.2, в объемах и количествах, предусмотренных планом посева, установленным в соответствии с конкретным стандартом на метод испытания.

В маркированные чашки Петри вносят предусмотренные объемы разведений, подлежащих исследованию. Наливают в каждую чашку объем среды в соответствии с 7.7. Незамедлительно и тщательно перемешивают расплавленную среду и посевной материал так, чтобы микроорганизмы равномерно распределились в массе среды. Для охлаждения и застывания оставляют чашки Петри на холодной горизонтальной поверхности (время затвердения агара не должно превышать 10 мин).

Если в исследуемом продукте предполагается присутствие микроорганизмов, образующих при росте налеты на поверхности среды («ползучий» рост колоний, например Proteus spp.), то при выполнении исследований чашки Петри с посевным материалом заливают сверху стерильным голодным агаром или же агаром, идентичным питательной среде.

9.3.2 Поверхностный посев

Посевной материал вносят в центр маркированной чашки Петри на поверхность агаровой питательной среды (приготовленной в соответствии с 7.7). Как можно быстрее равномерно распределяют его по поверхности среды с помощью стерильного стеклянного или пластикового шпателя до тех пор, пока на поверхности агара не останется видимых следов жидкости.

Для улучшения распределения могут быть использованы стеклянные шарики. В некоторых случаях, установленных в стандартах на конкретные методы испытаний, посевной материал наносят на мембрану и затем распределяют с помощью стеклянных шариков.

Засеянные чашки немедленно переворачивают и быстро помещают в термостат, установленный на соответствующую температуру (кроме особо оговоренных случаев). Если наблюдается чрезмерное обезвоживание среды (например при 55 °С или вследствие интенсивной циркуляции воздуха), чашки перед термостированием неплотно укладывают в пластиковый пакет или аналогичное приспособление с тем же эффектом. В период термостатирования допускаются кратковременные колебания температуры, например, во время таких обычных операций, как загрузка или разгрузка термостата.

Примечание —В отдельных случаях, чтобы не спутать частицы исследуемого продукта с колониями микроорганизмов, полезно приготовить дубликаты засеянных чашек, которые хранят при температуре 2 °С для последующего сопоставления при подсчете с инкубированными засеянными чашками.

Чашки следует анализировать непосредственно после термостатирования. В других случаях, кроме особо оговоренных, их хранят не более 24 ч в холодильнике (4.7).

9.3.4 Подсчет колоний

После термостатирования, установленного соответствующим стандартом на конкретный метод испытания, подсчитывают количество колоний на каждой чашке, содержащей менее 300 колоний (или менее другого количества, установленного соответствующим стандартом на конкретный метод испытания).

П римечание —В некоторых случаях подсчет колоний может быть затруднен (например в присутствии инвазивных микроорганизмов). Эти случаи рассматриваются в соответствующих стандартах на конкретные методы испытаний.

9.3.5 Обработка результатов

9.3.5.1 Метод расчета (общий случай)

Для получения достоверных результатов при подсчете количества колоний необходимо, чтобы хотя бы в одной чашке содержалось не менее 15 колоний.

Количество микроорганизмов N в 1 г (см 3 ) пробы вычисляют как средневзвешенное значение из подсчетов на двух последовательных разведениях по формуле

+ 0,ln₂)d ’

где 2С — сумма колоний, подсчитанных на всех чашках в двух последовательных разведениях, из которых хотя бы одна чашка содержит не менее 15 колоний;

V — объем посевного материала, внесенного в каждую чашку, см 3 ;

Я] — количество отобранных для подсчета чашек в первом разведении;

«2 — количество отобранных для подсчета чашек во втором разведении; d — коэффициент разбавления, соответствующий первому разведению.

Результат вычисления округляют до двух значащих цифр. Для этого, если последняя цифра меньше 5, предшествующую цифру не изменяют; если последняя цифра равна или более 5, предшествующую увеличивают на единицу. Округление проводят поэтапно до получения двух значащих цифр.

За результат принимают количество микроорганизмов в 1 см 3 (жидкие продукты) или в грамме (прочие продукты), выраженное в виде числа от 1,1 до 9,9, умноженного на 10 в соответствующей степени.

_N _ £С _ 168 + 215 + 14 + 25 _ 422 _ ₁₀,_ОЛ Г(и_{1 +} 0,1и₂) — 10- 2 0,022

Округление результата дает 19000 или 1,9 • 10 4 микроорганизмов в грамме продукта.

9.3.5.2 Метод расчета при проведении идентификации

Если используемый метод требует идентификации, определенное количество А колоний (обычно 5) пересевают с каждой чашки, отобранной для подсчета колоний. После идентификации рассчитывают для каждой чашки количество идентифицированных микроорганизмов а по формуле

где Ъ — количество колоний, соответствующих критериям идентификации;

С — общее количество колоний.

Результат вычисления округляют до целого числа, как описано в 9.3.5.1.

Количество ^идентифицированных микроорганизмов, присутствующих в 1 г (см 3 )испытуемой пробы рассчитывают как средневзвешенное значение по 9.3.5.1, заменив 2 С на 2я.

Прямой подсчет жидкого продукта дал следующие результаты:

— в первом выбранном разведении (10 —3 ) в двух чашках выявлено соответственно: 66 и 80 колоний;

— во втором выбранном разведении (10 —4 ) — 4 и 7 колоний.

из чашки с 66 колониями для идентификации отобрано 8 колоний, из которых 6 соответствовали критериям; следовательно а — 50;

из чашки с 80 колониями отобрано 9 колоний, из которых 6 соответствовали критериям; следовательно а = 53;

из чашки с 7 колониями отобрано 5 колоний, из которых 4 соответствовали критериям; следовательно а = 6;

из чашки с 4 колониями все 4 идентифицированы положительно; следовательно а = 4.

50 + 53 + 6 + 4 1(2+ 0,1-2)- 10 -3

2,2 ■ 10 _3

Таким образом, количество обнаруженных в пробе микроорганизмов составляет 5,1 • 10 4 в 1 см 3 .

9.3.5.3 Приближенные оценки количества микроорганизмов

9.3.5.3.1 Если в каждой из двух чашек содержится менее 15 колоний на уровне исходной пробы (жидкие продукты) или исходной суспензии (прочие продукты), то рассчитывают среднее арифметическое у колоний, подсчитанных на этих чашках.

Результат выражают следующим образом:

— для жидких продуктов — приближенное количество микроорганизмов в 1 см 3 N_E — у;

— для прочих продуктов — приближенное количество микроорганизмов в 1 г IV_Е =y/d, где d — коэффициент разбавления исходной суспензии.

9.3.5.3.2. Если две чашки не содержат колоний на уровне исходной пробы (жидкие продукты) или исходной суспензии (прочие продукты), то результаты выражают следующим образом:

— менее 1 микроорганизма в 1 см 3 (жидкие продукты);

— менее l/d микроорганизмов в 1 г (прочие продукты), где d — коэффициент разбавления исходной суспензии.

9.3.6 Доверительные пределы

Для того, чтобы определить достоверность результатов и избежать слишком однозначной их трактовки, необходимо рассчитать доверительные интервалы, которые характеризуют статистическое распределение микроорганизмов в образце.

Прочие погрешности связаны с самими используемыми методами исследований, особенно с ошибками разведений. Влияние этих погрешностей на результаты испытаний может быть разным для разных лабораторий.

9.3.6 Метод расчета (общий случай)

Доверительный интервал д, характеризующий статистическое распределение микроорганизмов в пробе при доверительной вероятности Р = 0,95, рассчитывают по формуле: