Пептонная вода
Смотреть что такое «Пептонная вода» в других словарях:
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ — ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, искусственные среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных условиях. Впервые были введены для изолирования отдельных видов бактерий Р. Кохом в 1881 году, что создало… … Большая медицинская энциклопедия
ХОЛЕРА — ХОЛЕРА. Содержание: История. 265 Холера в России и СССР . 269 Этиология. • . •. 272 Эпидемиология X. 278 Географическое распространение и статистика 281 Патологическая анатомия … Большая медицинская энциклопедия
Питательные среды для бактерий — Под этим именем подразумевают различного рода субстраты, приготовляемые для изучения жизнедеятельности микроорганизмов при определенных условиях, изменяемых по воле экспериментатора. Микрохимические анализы и опыты искусственной культуры выяснили … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона
Питательные среды бактериологические — жидкие, полужидкие или плотные субстраты, используемые для выращивания микроорганизмов в лабораторных или производственных условиях. Используют для выделения чистых к р бактерий, грибов и простейших из биогенных или абиогенных объектов, для… … Словарь микробиологии
СРЕДЫ ПИТАТЕЛЬНЫЕ — среды питательные, субстраты, используемые для культивирования в искусственных условиях микроорганизмов и культур тканей. В микробиологической практике С. п. широко применяют для постановки лабораторного диагноза инфекционных заболеваний, для… … Ветеринарный энциклопедический словарь
MIIK РООРГАНИЗМЫ — денные у человека. Rhizopoda Главнейшая окраска Локализация Пи г | менто j обра I Культура зова | ние | Патогенность ДЛЯ | чело | века i Влажная фиксация | Толстые кишки, не Гейденгайна, затем ! чень, мозг, легкое протрава железо i аммиачными… … Большая медицинская энциклопедия
Пита́тельные сре́ды — субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности. Питательные среды различаются по назначению, консистенции и составу. По назначению их… … Медицинская энциклопедия
Посев (микробиология) — У этого термина существуют и другие значения, см. Посев. Культура микобактерий на яичной среде Левенштейна Йенсена … Википедия
Питательная среда — Питательная среда вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред. Содержание 1 Требования, предъявляемые к средам 2 Классификация … Википедия
жидкая культуральная среда — 3.3.3.1 жидкая культуральная среда: Культуральная среда, состоящая из водного раствора одного или более компонентов (например, пептонная вода, питательный бульон). Примечания 1 В некоторых случаях к жидкой культуральной среде добавлены твердые… … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации
Источник
Питательные среды, принципы их классификации
Основой бактериологических работ являются питательные среды, нередко определяя своим качеством результаты исследования.
Основные требования, предъявляемые к питательным средам:
1. Питательные среды должны содержать все необходимые для питания микроба питательные вещества, т.е. обладать питательностью.
2. Иметь достаточную влажность
3. Иметь оптимальную рН (7,2-7,6) кислотность среды.
4. Обладать изотоничностью (концентрация NaCl 0,87%), для галофильных бактерий концентрация соли 1% и выше.
5. Иметь оптимальный электронный потенциал, свидетельствующий о содержании в среде растворенного кислорода. Он должен быть высоким для аэробов и низким для анаэробов.
6. Быть прозрачными, чтобы был виден рост бактерий, особенно в жидких средах.
7. Быть стерильными (чтобы не было других бактерий).
Для приготовления питательных сред используют продукты животного происхождения (мясо, рыба, кровь, яйца, молоко) и продукты растительного происхождения (картофель). Также используют синтетические питательные среды, составленные из химических соединений.
Источником азота для бактерий служат простые аммонийные соединения, аминокислоты или пептоны; источником углерода – сахар, многоатомные спирты, органические кислоты. Потребность бактерий в неорганических элементах удовлетворяется прибавляемыми к питательной среде солями: NaCl, КН2РО4, К2НРО4.
В зависимости от консистенции питательные среды могут быть: жидкими, полужидкими и плотными. Плотность среды достигается добавлением агара. Агар- полисахарид, получаемый из водорослей. Он плавится при температуре 100 оС, остывает при температуре 45-50 оС. Для полужидких сред агар добавляют в концентрации 0,5%, для плотных – 1,5-2%. Жидкие среды не содержат агар-агара.
По составу питательные среды могут быть простыми и сложными. К простым средам относятся пептонная вода, мясопептонный бульон, мясопептонный агар, агар Хоттингера. Сложные – это простые с добавлением дополнительного питательного компонента (сахарный, сывороточный, желчный бульоны, кровяной, сывороточный, желточно-солевой агары, среда Кита-Тароцци, Вильсона-Блера).
В зависимости от назначения среды подразделяются:
1. Общего назначения –для культивирования большинства бактерий (мясопептонный агар, кровяной агар).
2. Специального назначения:
а) элективные среды – это среды, на которых растет какой-то определенный микроорганизм. Например, щелочной агар, имеющий рН 9, служит для выделения холерного вибриона.
б) среды обогащения – это такие среды, которые стимулируют рост какого-то определенного микроорганизма, ингибируя рост других. Например, магниевая и селенитовая среды стимулируют рост бактерий рода сальмонелла, ингибируя рост кишечной палочки.
в) дифференциально-диагностические среды служат для изучения ферментативной активности бактерий (среды Гисса).
г) комбинированные питательные среды сочетают в себе элективную среду, подавляющую рост сопутствующей флоры и дифференциально-диагностическую (среда Плоскирева для выделения шигелл, висмут-сульфитный агар – для сальмонелл). Обе эти среды ингибируют рост кишечной палочки.
С целью дифференциации прототрофных и ауксотрофных бактерий используют селективные среды. Прототрофы растут на минимальной среде, содержащей только соли и углеводы, так как они сами способны синтезировать нужные им для развития метаболиты. Ауксотрофы нуждаются в средах, содержащих определенные аминокислоты, витамины, т.е. факторы роста.
Приготовление питательных сред – один из наиболее ответственных и трудных участков работы бактериологической работы.
В настоящее время медицинской промышленностью организовано производство консервированных сред. Сухие питательные среды находятся в пластмассовых банках с плотно завинчивающимися крышками, обеспечивающими герметичность.
Условия культивирования бактерий:
1. Наличие полноценной питательной среды.
2. Определенная температура культивирования (оптимальная температура 370С).
3. Определенная атмосфера культивирования. Для строгих аэробов необходим кислород, поэтому они хорошо растут на поверхности агара чашках Петри или в тонком верхнем слое жидкой среды. Для роста аэробов в глубинном слое жидкой среды необходимо непрерывно перемешивать или встряхивать питательные среды, чтобы кислород распределялся по всему объему среды. Для факультативных анаэробов используют те же методы. Микроаэрофилы размножаются при пониженном парциальном давлении кислорода. Концентрация СО2 должна быть 1-5%. Для этого используют специальные СО2 –инкубаторы или посевы помещают в эксикаторы, в которых устанавливают горячую свечу. Для роста облигатных анаэробов необходимо исключить доступ кислорода. Для этого добавляют к питательным средам редуцирующих кислород веществ (тиогликолевая кислота), регенерация от кислорода воздуха жидких питательных сред путем их кипячения, использование поглотителей кислорода, помещая их в герметически закрываемые емкости «газпаки», использование анаэростатов.
4. Время культивирования (18-48 часов). Для культивирования микобактерий туберкулеза (3-4 недели).
5. Освещение. Для выращивания фототрофных бактерий необходим свет.
6. Культивирование облигатных внутриклеточных паразитов-бактерий, относящихся к родам риккетсия, эрлихия, коксиелла, хламидия осуществляют на культурах клеток или в организме животных и членистоногих, а также в куриных эмбрионах.
В промышленных условиях для получения биомассы бактерий или грибов с целью получения антибиотиков, вакцин, диагностических препаратов культивирование осуществляется в аппаратах (ферментерах) при строгом соблюдении оптимальных параметров роста и размножения культур.
Автор: Доскабылова Айнур
Областной медицинский центр, отделение
Источник
ГК «Униконс»
Продвижение и реализация комплексных пищевых добавок, антисептиков и др. продукции.
«Антисептики Септоцил»
Септоцил. Бытовая химия, антисептики.
«Петритест»
Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.
«АльтерСтарт»
Закваски, стартовые культуры. Изготовление любых заквасок для любых целей.
- Вы здесь:
- Библиотека технолога
- ГОСТы, документы
- ГОСТ 31659-2012 — Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella
Приложение В (обязательное)
Приложение В (обязательное)
Состав и приготовление питательных сред и реактивов
В.1 Забуференная пептонная вода
В. 1.1 Состав:
— пептон — 10,0 г;
— хлористый натрий — 5,0 г;
— двузамещенный фосфорнокислый натрий 12-водный (Na2HPО4 • 12Н2О) — 9,0 г;
— однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2РО4) — 1,5 г;
— вода — 1000 см3.
В.1.2 Приготовление
При нагревании компоненты растворяют в воде. Устанавливают такой рН, чтобы после стерилизации он составлял (7,0 ± 0,2) при температуре 25 °С. Среду разливают во флаконы подходящей вместимости с учетом добав¬ления необходимой навески продукта. Если навеска равна 25 г, то забуференную пептонную воду разливают по 225 см3. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ± 1) °С.
В.2 Среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон)
В.2.1 Раствор А
В.2.1.1 Состав:
— ферментативный гидролизат сои — 5,0 г;
— хлористый натрий — 8,0 г;
— фосфорнокислый однозамещенный калий (КН2РО4) -1,4 г;
— фосфорнокислый двузамещенный калий (К2НРО4) — 0,2 г;
— вода — см3.
В.2.1.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании до температуры около 70 °С. Раствор готовят за день до приготовления RVS-бульона.
В.2.2 Раствор В
В.2.2.1 Состав:
— хлористый магний 6-водный (MgCI2 ∙ 6Н2О) — 400 г;
— вода — 1000 см3.
В.2.2.2 Приготовление
Хлористый магний растворяют в воде. Поскольку эта соль очень гигроскопична, рекомендуется из новой открытой упаковки растворять ее по определенной схеме. Например, к 250 г хлористого магния 6-водного добавляют 625 см3 воды, получая раствор объемом 788 см3 массовой концентрации 31,7 г/100 см3. Состав раствора соответствует В.2.2.1. Раствор переносят в бутылку из темного стекла с притертой пробкой и хранят при комнатной темпе-ратуре не более двух лет.
В.2.3 Раствор С
В.2.3.1 Состав:
— малахитовый зеленый оксалат — 0,4 г;
— вода — 100 см3.
В.2.3.2 Приготовление
Малахитовый зеленый оксалат переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки. Раствор переносят в бутылку из темно¬го стекла, хранят при комнатной температуре не более 8 мес.
В.2.4 Готовая среда
В.2.4.1 Состав:
— раствор А (см. В.2.1) — 1000 см3;
— раствор В (см. В.2.2) — 100 см3;
— раствор С (см. В.2.3) — 10 см3.
В.2.4.2 Приготовление
Прибавляют к 1000 см3 раствора А 100 см3 раствора В и 10 см3 раствора С. Устанавливают такой рН, чтобы после стерилизации он составлял (5,2 ± 0,2). Перед использованием среду разливают по пробиркам по 10 см3. Сте¬рилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (115 ± 1) °С. Рекомендуется использовать среду в день приготовления. При необходимости допускается готовую среду хранить по ГОСТ 10444.1.
Следует учитывать, что на этой среде не растет S. Typhi.
Примечание — Конечный состав среды: ферментативный гидролизат сои – 4,5 г/дм3; хлористый натрий – 7,2 г/дм3; фосфорнокислый однозамещенный калий – 1,26 г/дм3, фосфорнокислый двузамещенный калий – 0,18 г/дм3; хлористый магний безводный – 13,4 г/дм3 или хлористый магний 6-водный – 28,6 г/дм3; малахитовый зеленый оксалат – 0,036 г/дм3.
В.3 Селенитовая среда
Селенитовую среду готовят из двух растворов.
В.3.1 Раствор 1
В. 3.1.1 Состав:
— пептон – 5,0 г;
— двузамещенный фосфорнокислый натрий безводный – 7,0 г;
— однозамещенный фосфорнокислый натрий – 3,0 г;
— лактоза – 4,0 г;
— вода – 1000 см3.
В.3.1.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты в воде. Путем изменения соотношения фосфатных солей устанавливают рН (7,0 ± 0,1). Среду разливают по 100 см3 в колбы или флаконы и стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение двух дней или при температуре (112 ± 1) °С в течение 30 мин.
В.3.2 Раствор 2
В. 3.2.1 Состав:
— кислый селенистокислый натрий (NaHSeO3) — 10,0 г;
— вода — 100 см3.
Кислый селенистокислый натрий растворяют с соблюдением правил асептики в стерильной дистиллированной воде. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
В.3.3 Готовая среда
В.3.3.1 Состав:
раствор 1 – 100 см3:
раствор 2-4 см3.
В.3.3.2 Приготовление среды
К раствору 1 прибавляют раствор 2, среду разливают по 10 см3 в пробирки.
Стерилизация приготовленной среды не допускается, так как при этом происходит редукция кислого селенистокислого натрия, выпадает осадок красного цвета и среда становится непригодной для использования.
Селенитовую среду выпускают в сухом виде и готовят по инструкции, указанной на этикетке.
В.4 Тетратионатный бульон Мюллер-Кауфман
В.4.1 Основа среды
В. 4.1.1 Состав:
— мясо-пептонный бульон — 100 см3:
— углекислый кальций — 4,5 г.
В.4.1.2 Приготовление среды
В мясо-пептонный бульон, приготовленный по ГОСТ 10444.1, помещают стерильный углекислый кальций. Углекислый кальций стерилизуют по ГОСТ 10444.1.
Приготовленную основу стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ± 1)°С в течение 20 мин.
В.4.2 Раствор 1
В. 4.2.1 Состав:
— гипосульфит натрия (Na2S2О3 ∙ 5Н2О) – 50 г;
— вода — до 100 см3.
В.4.2.2 Приготовление
Гипосульфит натрия помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор переливают в колбу или флакон и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин или при температуре (121 ±1) °С в течение 20 мин. Раствор хранят не более 1 мес при температуре (3 ± 2) °С.
В.4.3 Раствор 2
В. 4.3.1 Состав:
— йодистый калий – 25 г;
— йод кристаллический – 20 г;
— вода — до 100 см3.
В.4.3.2 Приготовление
Йодистый калий помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, прибавляют кристаллический йод, растворяют его. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят при комнатной температуре в плотно закрытом сосуде из темного стекла.
В.4.4 Раствор 3
В.4.4.1 Состав:
— бриллиантовый зеленый – 0,5 г;
— вода – 100 см3.
В.4.4.2 Приготовление
Бриллиантовый зеленый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
В.4.5 Раствор 4
В.4.5.1 Состав:
— сухая бычья желчь – 10 г
— вода – до 100 см3.
В.4.5.2 Приготовление
Сухую желчь растворяют в 100 см3 дистиллированной воды или используют 100 см3 натуральной желчи. Раствор желчи или натуральную желчь стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин. Раствор хранят не более 1 мес при температуре (3 ± 2) °С.
В.4.6 Готовая среда
В.4.6.1 Состав:
— основа среды по В.4.1 – 100 см3:
— раствор 1 – 1 0 см3:
— раствор 2 – 2 см3;
— раствор 3 – 0,2 см3:
— раствор 4 – 5 см3.
В.4.6.2 Приготовление
Указанные растворы прибавляют к основе среды в приведенном выше порядке, перемешивая смесь после каждого прибавления, среду разливают по 10 см3 в пробирки.
Среду используют в день приготовления.
Для повышения селективности среды допускается добавлять к среде раствор новобиоцина натриевой соли из расчета 0,5 см3 раствора новобиоцина натриевой соли на 100 см3 основы среды.
В.4.7 Раствор новобиоцина
В.4.7.1 Состав:
— новобиоцин натриевая соль – 0,04 г;
— вода – 5 см3.
В.4.7.2 Приготовление
Новобиоцин натриевую соль растворяют в дистиллированной воде. Раствор стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 через мембранный фильтр размером пор 0,22 мкм, хранят при температуре (3 ± 2) °С в течение четырех недель.
В.5 Ксилоза-лизин-деоксихолатный агар (ХLD-агар)
В.5.1 Основа среды
8.5.1.1 Состав:
— дрожжевой экстракт (порошок) – 3,0 г;
— хлористый натрий (NаС1) – 5,0 г;
— ксилоза – 3,75 г;
— лактоза – 7,5 г;
— сахароза – 7,5 г;
— L-лизин гидрохлорид – 5,0 г;
— тиосульфат натрия – 6,8 г;
— железо III аммоний цитрат – 0 ,8 г;
— феноловый красный – 0,08 г (или 20 см3 раствора, приготовленного по 5.2, если среда состоит из отдельных компонентов);
— деоксихолат натрия – 1,0 г;
— агар – от 9 до 18 г*;
— вода – 1000 см3.
* Зависит от желирующих свойств.
В.5.1.2 Приготовление
При нагревании растворяют дегидратированные компоненты основы или дегидратированную основу в воде при частом помешивании. Доводят до кипения, но не кипятят, избегая перегрева.
Устанавливают рН так, чтобы после прогрева он составлял (7,4 ± 0,2) при температуре 25 °С. Разливают основу в пробирки или флаконы подходящей вместимости. Затем прогревают на кипящей водяной бане около 5 мин.
В.5.2 Раствор фенолового красного
В.5.2.1 Состав:
— феноловый красный – 0,4 г;
— вода – 100 см3.
В.5.2.2 Приготовление
Феноловый красный переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре.
В.5.3 Приготовление чашек со средой
Среду после прогрева переносят в водяную баню при температуре от 44 °С до 47 °С, перемешивают и разливают в чашки, дают затвердеть. Перед использованием среду в чашках предпочтительно с открытой крышкой и поверхностью среды вниз подсушивают в шкафу с температурой от 37 °С до 55 °С до тех пор, пока поверхность среды не станет сухой. Допускается хранить чашки со средой при температуре (3 ± 2) °С не более пяти дней.
В.6 Дифференциально-диагностические среды
В.6.1 Висмут-сульфит агар (агар Вильсон-Блера).
В. 6.2 Среда Плоскирева.
В.6.3 Среда Эндо.
В.6.4 Среда Левина.
Среды готовят по инструкции, указанной на этикетке.
В.6.5 Бриллиантовый зеленый агар
В. 6.5.1 Состав:
— дрожжевой экстракт – 3 г:
— пептон – 10 г;
— хлористый натрий – 5 г;
— лактоза – 10 г;
— сахароза – 10 г;
— феноловый красный – 0,08 г (или 20 см3 раствора, приготовленного по В. 5.2, если среда состоит из отдельных компонентов);
— агар – 20 г;
— бриллиантовый зеленый — 0,0125 г (или 2,5 см3 раствора, приготовленного по В.4.4);
— вода – 1000 см3.
В.6.5.2 Приготовление
При нагревании растворяют дегидратированные компоненты основы или дегидратированную основу в воде при частом помешивании. Доводят до кипения, кипятят 1 мин.
Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (6,9 ± 0,1) при температуре 25 °С. Разливают среду во флаконы подходящей вместимости. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ± 1) С. Охлаждают до температуры от 45 °С до 50 °С и разливают в чашки Петри.
В.7 Питательный агар
В.7.1 Состав:
— мясной экстракт – 3 г;
— пептон – 5 г;
— агар – от 9 до 18 г;
— вода – 1000 см3.
В.7.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (7,4 ± 0,2) при температуре 25 °С. Переносят питательную среду в пробирки или флаконы, стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ±1) °С.
В.7.3 Приготовление чашек с питательным агаром
Переносят приблизительно 15 см3 расплавленной среды в стерильные чашки Петри и поступают по В.5.3.
В.8 Мясо-пептонный агар
Мясо-пептонный агар готовят по ГОСТ 10444.1 или используют ГРМ-агар. ГРМ-агар готовят по инструкции, указанной на этикетке.
В.9 Мясо-пептонный бульон с глюкозой
Мясо-пептонный бульон с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1. Для посевов используют среду, разлитую в пробирки по 6-7 см3.
В.10 Среды с углеводами (среды Гисса)
Среды с углеводами (среды Гисса) готовят по ГОСТ 10444.1 или используют сухие среды с углеводами, которые готовят по инструкции, указанной на этикетке.
В.11 Трехсахарный железистый агар (TSI-arap)
В. 11.1 Состав:
— мясной экстракт – 3,0 г;
— дрожжевой экстракт – 3,0 г;
— пептон – 20,0 г;
— хлористый натрий (NaCl) – 5,0 г;
— лактоза – 10,0 г;
— сахароза – 10,0 г;
— глюкоза – 1,0 г;
— железо (III) цитрат – 0,3 г;
— тиосульфат натрия – 0,3 г;
— феноловый красный – 0,024 г (или 6 см3 раствора, приготовленного по В.5.2, если среда состоит из отдельных компонентов);
— агар – от 9 до 18 г;
— вода – 1000 см3.
В.11.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную основу среды в воде. Устанавливают такой рН, чтобы после стерилизации он составлял (7,4 ± 0,2) при температуре 25 °С. Переносят среду в пробирки по 7-8 см3. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при (121 ± 1) °С. Затем пробирки оставляют в наклонном положении так, чтобы высота столбика среды составляла около 2,5 см, а скошенная поверхность над ним – 5 см.
Допускается использование агара Клиглера или среды Олькеницкого. Среды готовят по инструкциям, указанным на этикетках.
В.12 Агар с мочевиной (агар Кристенсена)
В 12.1 Основа среды
В.12.1.1 Состав:
— пептон – 1,0 г;
— глюкоза – 1,0 г;
— хлористый натрий (NaCl) – 5,0 г;
— однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2РО4) – 2,0 г;
— феноловый красный — 0,012 г (или 3 см3 раствора, приготовленного по В.5.2, если среда состоит из отдельных компонентов);
— агар – от 9 до 18 г;
— вода – 1000 см3.
В.12.1.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную основу среды в воде. Устанавливают такой pH, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 ± 0,2) при температуре 25 °С. Основу среды в определенных объемах разливают в колбы или флаконы и стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ±1) °С в течение 15 мин.
В.12.2 Раствор мочевины
В. 12.2.1 Состав:
— мочевина – 40 г;
— вода до конечного объема – 100 см3.
В.12.2.2 Приготовление
Мочевину помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют в воде, объем раствора доводят водой до метки. Раствор мочевины стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 через фильтры с размером пор 0,22 мкм или текучим паром в течение 30 мин.
В.12.3 Раствор фенолового красного
В.12.3.1 Состав и приготовление — по В.5.2.
В.12.4 Готовая среда
В.12.4.1 Состав:
— основа (см. В.12.1) – 950 см3;
— раствор мочевины (см. В.12.2) – 50 см3.
В.12.4.2 Приготовление
Прибавляют с соблюдением правил асептики раствор мочевины к основе, предварительно расплавленной и охлажденной до температуры от 44 °С до 47 °С. Разливают готовую среду в стерильные пробирки 7-8 см3. После стерилизации среду скашивают по В.11.2.
В.13 L-лизиндекарбоксилазная среда
В.13.1 Состав:
— L-лизин моногидрохпорид – 5,0 г;
— дрожжевой экстракт – 3,0 г;
— глюкоза – 1,0 г;
— бромкрезоловый пурпуровый – 0,015 г (или 5 см3 раствора, приготовленного по В.13.3);
— вода – 1000 см3.
В.13.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании.
Устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 ±0,2) при температуре 25 °С.
Переносят среду в пробирки по 2-5 см3.
Стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ±1) °С.
В.13.3 Раствор бромкрезолового пурпурового
В. 13.3.1 Состав:
— бромкрезоловый пурпуровый – 0,3 г;
— вода – 100 см3.
В.13.3.2 Приготовление
Бромкрезоловый пурпуровый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
В.14 β-галактозидазный реактив
8.14.1 Буферный раствор
В. 14.1.1 Состав:
— фосфорнокислый однозамещенный натрий (NaH2PО4) — 6,9 г;
— гидроксид натрия (NaOH) концентрации 10 моль/дм3 — около 3 см3;
— вода до конечного объема — 50 см3.
В.14.1.2 Приготовление
Растворяют фосфорнокислый однозамещенный натрий приблизительно в 45 см3 воды в мерном флаконе. Устанавливают рН с помощью раствора гидроксида натрия (7,0±0,2) при температуре 25 °С. Добавляют воду до объема 50 см3.
В.14.2 ONPG-раствор
В. 14.2.1 Состав:
— о-нитрофенил β-D-галактопиранозид (ONPG) — 0,08 г;
— вода – 15 см3.
В.14.2.2 Приготовление
Растворяют ONPG в воде температурой около 50 °С. Раствор охлаждают.
В.14.3 Готовый реактив
В.14.3.1 Состав:
— буферный раствор (см. В.14.1) – 5 см3;
— ONPG-раствор (см. В. 14.2) – 15 см3.
В.14.3.2 Приготовление
Готовят свежий раствор, прибавляя буферный раствор к ONPG-раствору.
В.15 Среда и реактивы для реакции Фогес-Проскауера (VP)
В.15.1 VP-среда
В. 15.1.1 Состав:
— пептон — 7 г;
— глюкоза — 5 г;
— фосфорнокислый двузамещенный калий (К2НРО4) — 5 г;
— вода — 1000 см3.
В.15.1.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании. Устанавливают такой рН, чтобы после стерилизации он составлял (6,9 ± 0,2) при температуре 25 °С. Среду разливают в пробирки по 3 см3. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ±1) °С.
В.15.2 Раствор креатина (N-амидиносаркозина)
В. 15.2.1 Состав:
— креатин моногидрат — 0,5 г;
— вода — 100 см3.
В.15.2.2 Приготовление
Креатин моногидрат растворяют в воде.
В.15.3 1-нафтол, спиртовой раствор
В.15.3.1 Состав:
— 1-нафтол — 6 г;
— спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья объемной долей 96 % -100 см3.
В.15.3.2 Приготовление
Растворяют 1-нафтол в этаноле.
В.15.4 Раствор гидроксида калия
В. 15.4.1 Состав:
— гидроксид калия (КОН) — 40 г;
вода — 100 см3.
В.15.4.2 Приготовление
Гидроксид калия растворяют в воде.
В.16 Реактивы для индольной реакции
В.16.1 Реактив Ковача
В. 16.1.1 Состав:
— 4-диметиламинобензальдегид – 5 г;
— соляная кислота плотностью ρ = 1,18 г/см3 + 1,19 г/ см3 – 25 см3;
— 2-метилбутан-2-ол (изобутиловый спирт) — 75 см3.
В.16.1.2 Приготовление
Компоненты перемешивают.
В.16.2 Реактив Эрлиха
В. 16.2.1 Состав:
— парадиметиламинобензальдегид – 1 г;
— этиловый спирт объемной долей 96% — 95 см3;
— соляная кислота плотностью ρ = 1,18 г/см3 + 1,19 г/см3 – 80 см3.
В.16.2.2 Приготовление
Компоненты перемешивают.
В.17 Триптон/триптофановая среда
В.17.1 Состав:
— триптон — 10 г;
— хлористый натрий (NаС1) – 5 г;
— DL-триптофан – 1 г;
— вода — 1000 см3.
В.17.2 Приготовление
Компоненты растворяют в горячей воде. Устанавливают такой рН, чтобы после стерилизации он составлял (7,5 ± 0,2) при температуре 25 °С. Разливают среду по 5 см3 в пробирки. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при темпе¬ратуре (121±1) °С.
В.18 Бульон Хоттингера
Бульон Хоттингера готовят по ГОСТ 10444.1. Для посевов используют среду, разлитую в пробирки по 6-7 см3.
В.19 Мясо-пептонный бульон с 0,05 % L-триптофана
В. 19.1 Состав:
— L-триптофан – 0,05 г;
— мясо-пептонный бульон — 100 см3.
В.19.2 Приготовление
L-триптофан растворяют в мясо-пептонном бульоне, приготовленном по ГОСТ 10444.1, разливают в пробирки по 6-7 см3 и стерилизуют при температуре (121 ±1) °С в течение 20 мин.
В.20 Полужидкий питательный агар
В.20.1 Состав:
— мясной экстракт – 3,0 г;
— пептон – 5,0 г;
— агар – от 4 до 9 г*;
— вода – 1000 см3.
* Зависит от желирующих свойств.
В.20.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании. Устанавливают такой рН, чтобы после стерилизации он составлял (7,0 ± 0,2) при температуре 25 °С. Разливают среду во флаконы подходящей вместимости. Стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре (121 ± 1) °С.
В.20.3 Приготовление пробирок с агаром
В стерильные пробирки наливают по 6-7 см3 свежеприготовленного агара.
В.21 Полужидкий мясо-пептонный агар
Готовят по ГОСТ 10444.1 также, как мясо-пептонный агар, но при приготовлении добавляют 4,0-9,0 г агара на 1 дм3 мясо-пептонного бульона, перед стерилизацией среду разливают по 6-7 см3 в пробирки.
В.22 Физиологический раствор
В.22.1 Состав:
— хлористый натрий (NаCl) – 8,5 г;
— вода – 1000 см3.
В.22.2 Приготовление
Хлористый натрий растворяют в воде. Устанавливают такой рН, чтобы после стерилизации он составлял (7,0 ± 0,2) при температуре 25 °С. Разливают во флаконы подходящей вместимости, стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ± 1) °С в течение 15 мин.
Допускается использование готовых и дегидратированных, в том числе хромогенных, питательных сред аналогичного состава и зарегистрированных на территории государств, принявших стандарт.
Источник
