О методе
ЛАЛ-тест для определения пирогенности лекарственных препаратов является активно развивающимся в настоящее время способом контроля качества лекарственных средств. Он может быть использован и в некоторых других областях, где необходимо быстрое обнаружение грамотрицательных бактерий или их эндотоксинов. В основе этого теста лежит способность лизата амебоцитов (клеток крови) мечехвоста специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий (липополисахаридами, ЛПС). В результате реакции эндотоксина и лизата происходит помутнение прозрачной реакционной смеси или образование твердого геля, что и служит индикатором присутствия эндотоксина.
Реакция лизата амебоцитов с эндотоксином была открыта в США в 1964 году, где и был налажен выпуск первых коммерческих препаратов. Поскольку первые исследования были проведены на мечехвостах вида Limulus polyphemus, препарат, полученный из их крови, был назван Лизат амебоцитов Limulus (Limulus amebocyte lysate), сокращенно ЛАЛ-реактив и, соответственно, ЛАЛ-тест.
ЛАЛ-тест считается сегодня наиболее надежным и перспективным способом проверки потенциальной пирогенности лекарственных средств. Преимущества этого теста: высокая чувствительность, простота выполнения, надежность, воспроизводимость, возможность получения количественного ответа. К несомненным преимуществам ЛАЛ-теста относится возможность анализировать в короткий срок большое число образцов. При массовом использовании ЛАЛ-тест, безусловно, дешевле теста на кроликах. Кроме того, этот метод дает возможность проводить постадийный контроль содержания эндотоксинов в процессе производства инъекционных препаратов.
Источник
Пробирки для разведения и анализа
Пробирки «Пиротест» 10х75 мм 50 шт/упак
Пробирки «Пиротест» 13х100 мм 30 шт/упак
Депирогенизированные пробирки с навинчиваемыми крышками 10х75 мм 50 шт/уп
Charles River Endosafe
Стеклянные круглодонные пробирки нейтрального стекла 10х75 мм предназначены для инкубирования реакционных смесей при проведении гель-тромб теста. Пробирки депирогенизированы и готовы к использованию.
Используются пробирки однократно.
Упакованы в алюминиевую фольгу (два слоя) и полиэтиленовую термоусадочную пленку (один слой). 10 упаковок в картонной коробке.
Пробирки депирогенизированы и готовы к использованию.
Используются пробирки однократно.
Упакованы в два слоя алюминиевой фольги и полиэтиленовую термоусадочную пленку.
Предназначены для инкубирования реакционных смесей при проведении гель-тромб теста, а также для хранения замороженного ЛАЛ-реактива.
Пробирки депирогенизированы и готовы к использованию.
Однократного применения. Упакованы в картонную коробку.
Источник
История и область применения
Началом разработки ЛАЛ-теста можно считать исследования американского ученого F. Bang, проведенные им в 1956 году. В своих опытах ученый наблюдал внутрисосудистое свертывание – коагуляцию – крови у мечехвостов в ответ на введение им взвеси грамотрицательных морских бактерий или термостабильного экстракта из этих бактерий. Работа по изучению этой реакции была продолжена F. Bang в соавторстве с J. Levin. В 1964 году они опубликовали статью Levin J., Bang F., The role of endotoxin in the extracellular coagulation of Limulus blood // Bull. Johns Hopkins Hosp., 115, 1964, которую по праву считают основополагающей в ЛАЛ-тесте. В этой работе авторы указывали, что реакцию коагуляции крови у мечехвостов вызывают эндотоксины грамотрицательных бактерий. Для инициации реакции нужны минимальные количества эндотоксина, а скорость реакции зависит от концентрации эндотоксина. Реакция коагуляции в общих чертах напоминает свертывание крови у млекопитающих. Отличие же состоит в том, что в этой реакции не принимают участия белки плазмы крови, а участвуют только белки, находящиеся в клетках крови – амебоцитах. Эти клетки и являются основой для получения специфического реактива. ЛАЛ-реактив получают из крови мечехвостов.
Мечехвосты – это древнейшие обитатели моря, сохранившиеся с Силурийского периода. Один из четырех известных видов — Limulus polyphemus- обитает около Атлантического побережья США. В летние месяцы мечехвосты мигрируют в зоны мелководья. В это время животных вылавливают, транспортируют на специальные станции, где у них берут кровь, и обратно возвращают в море. Кровь пропускают через центрифугу, осажденные амебоциты подвергают лизису. Лизат экстрагируют, активизируют, стабилизируют и сублимационно высушивают. Полученный ЛАЛ-реактив представляет собой стабильный реактив со сроком хранения не менее 4-х лет.
Источник
Пробирки для лал-теста
Расходные материалы Pyroclear® производства компании Associates of Cape Code являются первыми в отрасли продуктами, которые сертифицированы на отсутствие загрязнений эндотоксинами и (1 → 3) -β-D-глюканами. Сертифицированные продукты Pyroclear® включают депирогенизированные пробирки, 96-луночные микропланшеты, наконечники для пипеток и ЛАЛ-воду. Эти продукты предназначены для снижения риска получения неверных результатов тестирования из-за загрязненных аксессуаров.
Компания Associates of Cape Cod предлагает следующие виды пробирок:
- пробирки из натрий-силикатного стекла размера 10 х 75 мм для проведения исследований гель-тромб методом
- пробирки из боросиликатного стекла размером 8 х 75 мм для исследований инструментальными методами при помощи пробирочного ридера Pyros Kinetix Flex
- пробирки из боросиликатного стекла размером 12 х 75 мм для разведений реактивов, стандарта и образцов
- пробирки из боросиликатного стекла размером 13 х 100 мм
- апирогенные пробирки с алюминиевыми крышечками размера 16 х 90 мм
Компания Associates of Cape Cod предлагает следующие виды апирогенных наконечников: 250 мкл и 1000 мкл.
Для проведения ЛАЛ-теста как гель-тромб, так и инструментальными методами необходимы апирогенные пробирки с особыми свойствами стекла, а также с определенными размерами. В зависимости от методов и инструментов, на которых проводятся исследования (например, пробирочном ридере). Для хранения заранее подготовленных и замороженных ЛАЛ-реактивов удобны пробирки с алюминиевыми крышечками. Все пробирки применяются только один раз, поэтому необходимость заказывать пробирки для ЛАЛ-теста возникает у всех лабораторий, в которых проводятся ЛАЛ-исследования.
Компания «ЛАЛ Консалтинг лтд» предлагает купить пробирки для ЛАЛ-теста из натрий-силикатного, боросиликатного стекла различных размеров (от 8х75 до 16х90), а также стеклянные апирогенные пробирки с закручивающимися крышечками из алюминия.
В нашем ассортименте – расходные материалы от немецкого производителя высокотехнологичных материалов для медицинских исследований Eppendorf и ведущего американского производителя реактивов и расходных материалов для ЛАЛ-теста компании Associates of Cape Cod. Данные производители гарантируют высокое качество продукции. Основные ходовые позиции все имеются у нас в наличии, в связи с чем мы осуществляем быструю отгрузку со склада в Москве и доставку по России и странам СНГ .
Источник
О ЛАЛ-тесте
Для контроля качества инъекционных лекарств необходимо проверять в них уровень пирогенных примесей. Традиционно наличие или соответственно отсутствие в критически-значимых концентрациях таких примесей в инъекционных препаратах определялось на кроликах. Величина повышения температуры тела у животных на протяжении 3-5 часов служило показателем наличия или отсутствия пирогенных примесей в испытуемом препарате. Само собой разумеется что такой способ тестирования лекарств довольно затратен и не отличается гуманностью к животным.
Более 20 лет назад был предложен альтернативный метод определения наличия в лекарствах пирогенных примесей. Дело в том что наиболее часто пирогенными примесями в лекарственных препаратах являются бактериальные эндотоксины – фрагменты внешней оболочки грам-отрицательных бактерий. В основе нового метода лежал процесс физико-химического взаимодействия эндотоксинов с лизатом клеток крови (амебоцитов) мечехвостов, в результате которого происходит образование геля различной плотности. Поскольку первые исследования проводились на мечехвостах Limulus polyphemus, то реактив, приготовленный из их крови, был назван Limulus Amebocyte Lysate, или сокращенно ЛАЛ-реактив, а сам метод получил название ЛАЛ-тест. В 1980 году этот тест был впервые включен в Фармакопею США, а начиная с 1983 года он получил признание во многих странах Европы.
Источник
